技术| 白纹伊蚊感染登革热病毒检测研究（一）：机制和检测方法

病毒分离培养是蚊虫登革病毒诊断的金标准, 主要包括动物接种法和组织培养法。

组织培养法是将病毒标本处理后接种于敏感细胞, 培养后电镜下观察细胞病变效应, 并进一步分离病毒。白纹伊蚊C6/36细胞对登革病毒的4种血清型都敏感, 操作简便, 且病毒分离的阳性率达95.0%, 可作为病毒细胞培养的首选方法。除此之外, 伪盾伊蚊(Ae. pseudoscutellaris)AP-61细胞、CLA-1细胞、LLC-MK2细胞、Vero细胞、BHK-21细胞等也可用于登革病毒的分离培养。病毒分离法操作繁琐, 标本中病毒含量少或病毒活性低时, 产生细胞病变慢, 实验周期较长, 因此一般不用于早期诊断。

PCR技术是利用双链DNA分子碱基配对原则, 在一定条件下扩增DNA片段的体外扩增方法。反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription and polymerase chain reaction, RT-PCR)是登革病毒检测的常用方法, 其特点是敏感、快速、所用标本量少, 可直接检测病原体, 不需要等待抗体的产生, 常用于早期诊断。

实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qPCR)自动化程度高, 比常规PCR仪特异性更强, 且有效解决了常规PCR的污染问题。TaqMan探针实时荧光PCR技术为一种灵敏、特异、快速、低污染的登革病毒检测方法, 可定性或定量检测登革热病例早期血清中的登革病毒。

多重实时荧光定量RT-PCR方法可同时检测登革病毒、基孔肯雅病毒等多种病毒, 灵敏度高、特异性强、稳定性好, 是一种可同时快速检测多种蚊媒病毒的新方法。

巢式PCR(nested PCR), 扩增特异性较强, 但较易污染。